郜金荣 |
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 回答问题 |
 2010-6-24 17:18:40 |
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魏慧龙，你们用的质粒是GFP基因突变了的，失去了发绿色荧光的能力。 |
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魏惠龙 |
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| 假阳性克隆 |
2010-6-23 22:58:54 |
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老师，我们这一次开放实验用的pET-28a质粒，是从上一组同学转化成功的受体菌中抽提出来的。我组经过转化的受体菌在含10ug/ml的卡那霉素、0.5mM IPTG的LB液体培养基振荡培养72小时后5000rpm×60秒，发现EP管底部有乳黄色菌体沉淀，但是没有绿色。
不知道是否是IPTG加入时间过早？
初步判断可能为假阳性克隆，由于卡那霉素用完了就没有再做平板划线。
也有可能是卡那霉素失效了，请问我们是否需要用从离心出的菌体中提取质粒与重组质粒一起跑胶，判断我们抽提出的质粒是否为空载？
由于这次实验时间较为仓促，当初用上一组的质粒时就没有花时间电泳检查，所以总体比较混乱。
这是我在写实验论文的时候碰到的一些疑问，我准备下学期再做一次，这学期估计时间不够了…… |
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郜金荣 |
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| 第三次月考答案 |
2010-6-2 10:27:02 |
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分子生物学期中考试（第3 次月考）答案
一、简答题
1、a 核苷5，三磷酸
b 双链DNA
c RNA多聚酶
d 否
2、a ，末端结构是甲基化鸟嘌呤核苷，通过5，－5，－三磷酸和mRNA5.端相连。
b 3，-OH端。
c 所有的mRNA分子（除了一些病毒）都有帽子结构。一些mRNA缺少poly(A)尾。
3、因为最初的转录本没有三磷酸，所以分子已经被加工过。加工可能是复杂的，也可能是简单的三磷酸水解，这一点从以上信息中并不能知道。
4、步骤abd是对的，c是错误的，氨基酸通过氨酰tRNA合成酶和tRNA相配。
5、a,c
二、论述题
1、在负调控中，和DNA结合的抑制物在转录发生时必须移去，在正调控中，激活分子必须和DNA结合。正、负自调控原理是一样的，区别在于基因的产物是基因自身的激活物还是抑制物。
2、F’OclacZ+/O+lacZ- ;lacZ的组成性表达。
F’OclacZ-/O+lacZ+ ; lacZ的诱导性表达。
3、突变如接近标准序列TATAAT,转录增强，突变如远离标准序列TATAAT, ,转录则降低。
4、这个机制认为mRNA转录的终止是通过前导肽基因的翻译来调节的，因为在前导肽基因中有两个相邻的色氨酸密码子，所以翻译这个前导肽的能力必定对于tRNATty(携带有色氨酸)的浓度是敏感的。在前导序列中，1区与2区互补，2区与3区互补外，3区又和4区互补，这四个区在不同条件下配对情况不同，当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNATrp也就少，这样翻译通过两个并邻的色氨酸密码子的速度就会很慢。由于在原核生物中，转录和翻译是偶联的，即mRNA一边转录，核糖体一边结合上去翻译出多肽，在这种情况下，在4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的trp密码子处），这时的前导区结构是2-3配对，3-4不形成终止结构，所以转录可继续进行直到将色氨酸操纵子中的结构基因全部转录完。而当培养基中色氨酸浓度高时，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，那3-4则可以配对形成茎环结构（终止结构）使转录暂停止，色氨酸操纵子中的结构基因不被转录，因而不再合成色氨酸。实际上RNA聚合酶在弱化子处的活性依赖于前导肽翻译中核糖体所处的位置。
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盛海伶 |
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| 啥意思啊？晕，题目都开始看不懂了，好难啊！！ |
2010-5-23 21:19:21 |
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试指出下面的大肠杆菌二倍体菌株分别对β-半乳糖苷酶和透性酶是组成型的。（8）
a．i+o+z-y+／i+oсz+y+。
b．i+o+z+y+／i-oсz+y-。
c．i+o+z-y+／i-oсz+y+。
d．i-o+z-y+／i+oсz+y-。
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郜金荣 |
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| 回答问题 |
2010-5-18 22:43:24 |
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1、转录就是RNA的生物合成。2、参与转录的生物大分子及其结构、功能。3、原核启动子的组成部分及各自的功能。4、順式位点应该指的是順式作用因子或順式作用原件，（即被基因表达调控蛋白识别结合的DNA序列。）。
如仍不懂，本周四下午找我，我当面解答。 |
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黄耀风 |
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| 转录一章 |
2010-5-18 17:06:23 |
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我总体的看了一遍关于转录这张的内容，可是思路很混乱，希望老师指点，还有顺反式作用位点的概念是什么？ |
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郜金荣 |
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| 第三次月考 |
2010-5-16 21:04:02 |
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分子生物学期中考试（第3 次月考）
一、简答题
1、a. 合成RNA的底物是什么？ （8）
b.模板是什么?
c.参与反应的酶是什么？
d.需要引物吗？
2、回答下列有关真核RNA的问题： （8）
a.什么是帽子结构？
b. poly（A）在mRNA的哪个末端？
c.是否有真核mRNA不含以上两种结构？
3、分离得到一种RNA分子，3’端含有-OH，5’端含有-P，能从中得到什么信息？（8）
4、下列哪些步骤属于真核生物合成蛋白质的过程？如果不是，请解释 （8）
a、tRNA与30S颗粒结合；
b、tRNA与70S核糖体结合；
c、通过氨酰合成酶使一个氨基酸与tRNA结合；
d、70S核糖体分开，形成30S和50S两种颗粒；
5、试指出下面的大肠杆菌二倍体菌株分别对β-半乳糖苷酶和透性酶是组成型的。（8）
a．i+o+z-y+／i+oсz+y+。
b．i+o+z+y+／i-oсz+y-。
c．i+o+z-y+／i-oсz+y+。
d．i-o+z-y+／i+oсz+y-。
二、论述题
1.正调控和负调控有什么不同？如何区别正、负调控？ （12）
2.请列出lacOc突变是顺式显性的遗传学证据。 （12）
3.启动子的-10区发生突变，会有怎样的结果？ （12）
4、简述色氨酸操纵子弱化机制 （24）
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郜金荣 |
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| 回答问题 |
2010-5-12 7:21:14 |
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郑文新，你好，由于近来太忙，没及时回答，sorry,蛋白质合成时，携带氨基酸的tRNA先进入核糖体的A位，接着翻转（由延伸因子EF-TU—GTP水解GTP供能），当和肽基位（P位）形成肽键后，移位（由延伸因子EF-G—GTP水解GTP供能），A位的tRNA移位到P位的同时，又翻转一次。 |
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